對熒光-PCR法的數(shù)據(jù)處理我們要了解一個關(guān)鍵的因素“Ct值”。在實(shí)時定量PCR的數(shù)據(jù)圖中，x-軸表示PCR循環(huán)數(shù)，y-軸表示擴(kuò)增反應(yīng)的熒光值，也就是擴(kuò)增產(chǎn)物的量。這個圖中有基線、閾值、Ct值這幾個概念，從這幾個值我們能夠最終得到模板中目的基因的含量。

　　基線是擴(kuò)增曲線中的水平部分。在反應(yīng)初階段，雖然產(chǎn)物是指數(shù)級增長，但是由于總量太少，其熒光處于背景水平，檢測不到熒光增加。因此基線信號的產(chǎn)生是由于測量的偶然誤差引起的。然而當(dāng)累積了足夠的擴(kuò)增產(chǎn)物，足以產(chǎn)生可檢測的熒光信號時，這個信號的值就被稱為閾值，通常閾值默認(rèn)為基線信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差×10。在閾值的前后，PCR的反應(yīng)仍然是指數(shù)級增長的，因此此時的PCR結(jié)果可靠，可以準(zhǔn)確地反映體系中模板的初始量。Ct值是信號強(qiáng)度達(dá)到閾值時所需要的循環(huán)數(shù)，也就是擴(kuò)增曲線與閾值的交叉點(diǎn)。

　　為什么知道了Ct值就能夠得到初的目的基因含量呢？

　　一個基因的單次反應(yīng)擴(kuò)增曲線中要計(jì)算擴(kuò)增產(chǎn)物的分子數(shù)N，它等于模板的分子數(shù)乘以1+擴(kuò)增效率的n次方，n代表循環(huán)次數(shù)。也就是說，如果擴(kuò)增效率為100%，產(chǎn)物分子數(shù)就等于模板數(shù)乘以2的n次方。但是顯然，在線性增長期和平臺期，擴(kuò)增效率不可能是100%，因此上述PCR理論方程只在指數(shù)期成立。