?
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
SW620（人結(jié)腸癌細胞）現(xiàn)貨供應Anti-CXCL13 Antibody(原貨號PB0726)研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

大鼠腎系膜細胞*培養(yǎng)基說明書Anti-CXCL2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 生長因子和激素  

4’-去甲基表鬼臼毒素6559-91-7*Anti-CXCL3 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 b-淋巴細胞 腫瘤細胞生物標志物  

7-木糖基-紫杉醇90332-66-4 實驗步驟Anti-CXCL2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物  

R型三七皂甙R2*Anti-CXCL16 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 神經(jīng)生物學 細胞周期蛋白 通道蛋白 細胞膜受體 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

柴胡皂苷D20874-52-6*Anti-CXCL5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 血管內(nèi)皮細胞 G蛋白信號  

法爾杜鵑素24211-30-1 *Anti-CXCL9 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 神經(jīng)生物學 信號轉(zhuǎn)導 G蛋白偶聯(lián)受體  

佛手柑內(nèi)酯484-20-8  實驗方法Anti-CXCL8 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 G蛋白偶聯(lián)受體  

山楂酸4373-41-5價格Anti-CXCL8 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)運蛋白 新陳代謝  

五味子素C61301-33-5價格Anti-CXCR1 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號  

五味子酯乙58546-55-7實驗步驟Anti-CXCL9 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 腫瘤細胞生物標志物  

11-羥基柳杉酚88664-08-8*Anti-CXCR2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 新陳代謝  

DL-谷氨酰胺實驗步驟Anti-CXCR2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶  

BOC-L-亮氨酸價格Anti-CXCR2 Antibody研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞類型標志物  

L-色氨酸甲酯鹽酸鹽實驗步驟Anti-CXCR1 Antibody研究領(lǐng)域  免疫學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導  

大豆酪蛋白消化物瓊脂培養(yǎng)基250g藥品中需氧菌總數(shù)測定

mEI瓊脂(腸球菌顯色培養(yǎng)基) 1000mL/瓶 incubation media mEI瓊脂(腸球菌顯色培養(yǎng)基) 1000mL/瓶

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 250g 營養(yǎng)要求較高的細菌的培養(yǎng)及溶血試驗，還藥品中梭菌的檢測。(《中華人民共和國藥典》201...

瓊脂培養(yǎng)基JAgarmediumJ(Deoxycholatecitrateagar)沙門氏菌選擇性分離培養(yǎng)

M17Agar

Korser氏肉湯發(fā)酵管  Korser氏肉湯發(fā)酵管  20支  BR

鹽發(fā)酵管  鹽發(fā)酵管  20支  BR

西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管  西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管  20支  BR

蛋白胨水(色酸肉湯)發(fā)酵管  蛋白胨水(色酸肉湯)發(fā)酵管  20支  BR
禽副粘病毒通用PCR檢測試劑盒說明書死亡相關(guān)蛋白6/Fas死亡區(qū)相關(guān)蛋白抗體Quicetone中文名：喹烯酮別名：分子式：C18H14N2O3

酶動力蛋白2抗體Dimetridazole中文名：二甲硝咪唑別名：1,2-Dimethyl-5-nitroimidazole分子式：C4H5N3O2

DVL3蛋白抗體Antipyrine中文名：安替比林別名：非那宗分子式：C11H12N2O

同源轉(zhuǎn)錄因子DLX5抗體Tiamulin中文名：泰妙菌素別名：分子式：C28H474S

21號染色體開放閱讀框106抗體Sulfadiazine中文名：磺胺嘧啶別名：分子式：C10H10N4O2S