注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
Pronase E4-雄烯-11β--3,17-二酮2-氯-5-甲酸 99%

Antipain dihydrochloride2,2-雙[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷 98%2-氯二苯甲酮 99%

Cholesterol esterase3-溴肉桂酸 98%4-氯-4'-羥基二苯甲酮 98%

Amyloglucosidase from aspergillus niger1，4-二（*基硅烷基）苯 96%二苯 99%

Acetyl CoA二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%4,4'-二氯二苯甲酮 99%

Glucose oxidase二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 對(duì)苯二酚（HQ）穩(wěn)定劑, 98%2,4-二羥基二苯甲酮 99%

D-AAO苯磺酸 98%4,4'-二羥基二苯甲酮 98%

Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae 正丁硫 standard for GC, ≥99% (GC)2-羥基-4-甲氧基-5-磺酸二苯甲酮 98%

Pepsin（porcine stomach mucose）N-丁基二乙胺 99%4-羥基二苯甲酮 98%

Pancreatin雙酚A三雙甲基烯酸酯 試劑級(jí)2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮 99%

Trypsin(bovine pancreas) 1-芐基哌 97%4-甲基二苯甲酮 98%

Trypsin(porcine pancreas)3-溴苯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于環(huán)境分析4,4'-二氟二苯甲酮 99%

Lipase(pocine pancreas)苯甲 無(wú)級(jí), 99.8%4-硝基二苯甲酮 99%

Lipase(Candida)乙基叔丁基 分析標(biāo)準(zhǔn)品2-苯基苯并咪唑  98%

CAT4-叔丁基吡啶 98%苯氧乙酸鈉 98%

Lysozyme(Chinken egg)鄰苯二甲酸丁芐酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品1,4-萘醌 95%

甲磺酸雷沙吉蘭HIF-1Alpha  缺氧誘導(dǎo)因子1α 多肽SOX10  轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體

白藜蘆histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白多肽SOSSC/C9orf80  單鏈DNA結(jié)合蛋白相互作用蛋白1

白藜蘆（標(biāo)準(zhǔn)品）histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白（C端多肽）Sortilin/NTR3/Gp95  神經(jīng)降壓素受體3抗體（糖蛋白95）

瑞替加濱堿histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白（N端多肽）SorLA/LRP9  低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白9抗體

瑞替加濱HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人類(lèi)免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體

利巴韋林HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人類(lèi)免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸結(jié)合蛋白2抗體

利巴韋林（標(biāo)準(zhǔn)品）Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽Somatostatin/GRIH  生長(zhǎng)抑素抗體

硫酸核糖霉素Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽Solute carrier family 1  溶質(zhì)攜帶物家族-1抗體

利福布丁HMGB1 (High Mobility Group Box protein 1)  高遷移率族蛋白-1(抗原)SODD  Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體

利福布?。?biāo)準(zhǔn)品）HSL(hormone-sensitive lipase)  荷爾蒙敏感脂肪酸（抗原）SOD4/CCS  超氧化物歧化酶4抗體
諾如病毒型PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人富組蛋白(HTN5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10個(gè)

人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃500ul

人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT250克

人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：250克

人鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。