組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
24-r-hopa-4(23),22(29)-diene-3β,6β-diol鄰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 99%β-胡蘿卜素 96%

(24S)-Cycloartane-3,24,25-triol 24,25-acetonide2-基-β-D-吡喃半乳糖苷 99%，n-animal originβ-胡蘿卜素 分析標準品

25-Anhydroalisol F對-α-D-葡萄糖吡喃苷 99%D-泛酸鈣 98%

25-Anhydrocimigel 3-O-beta-D-xyloside1-O-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷2,3,4,6-四乙酸鹽 98%葉酸 ≥97%(HPLC)

25-Hydroxycycloart-23-en-3-one三-O-乙?；?D-葡萄烯糖 98%煙酸 99%

25(R)-Hydroxyprotopanaxadiol5-硫代-D-葡萄糖 96%煙酸 分析標準品

25(S)-Hydroxyprotopanaxatriol2,3,4,6-四-O-芐基-D-吡喃半乳糖 98%煙酰胺 99%

25-O-Methylalisol A四乙酰核糖 98%煙酰胺 分析標準品，≥99.8%

25-O-methylcimigel-3-O-beta-D-xylopyraside5-溴-4氯-3吲哚基β-D 半乳糖 99%煙酰胺 ≥99.5% (HPLC)

26-r-8-oxo-alpha-ocerin二巰基 97%煙酰胺  用于細胞和昆蟲細胞培養(yǎng)，≥99.5% (HPLC)

27-Hydroxymangiferolic acidL-腎上腺素 98%（）D-泛 98%

27-Hydroxymangiferonic acid重去甲腎上腺素 ≥98%(HPLC),USP核黃素 98%

27-p-Coumaroyloxyursolic acid牛磺酸 99%醋酸維生素A USP/EP

28-Deoxonimbolide?；撬?USP級，已通過細胞培養(yǎng)測試醋酸維生素A 細胞培養(yǎng)級

28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid二乙二  >98%(GC)檸檬酸鈉，二  AR,99.0%

29-Hydroxyfriedelan-3-one乙二 AR,98%DL-α-酚 96%

銻(> 98%,BR)BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb (ChIP Formulated)phospho-RAD51(Thr310)  磷酸化Rad51抗體

結(jié)晶碳酸鈉(>99%,BR)SimpleChIP® Human CTGF Promoter PrimersPhospho-Rad17 (Ser645)  磷酸化細胞周期檢控Rad17蛋白抗體

中性氧化鋁(BR)SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primersphospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體

D-(>99%，BC)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)phospho-RAC1(Ser71)  磷酸化細胞遷移誘導因子5抗體

吲哚(>98%,BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)phospho-Rab24(Tyr17)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體

硫酸鋰(>98%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys23) (D6Y7M) Rabbit mAbphospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白Rab24抗體

*鹽Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) Antibodyphospho-Pyk2/PTK2B(Tyr402)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體

硅粉(>99%，BR)AGPAT2 (D8W9B) Rabbit mAbphospho-Pyk2 (Tyr881)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體

油酸鈉(>98%,BR )Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-PTPRA(Tyr798)  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗體

四甲基氯化銨(>99%,BR)Malonyl-Lysine [Mal-K] MultiMab™ Rabbit mAb mixphospho-PTPRA(Ser180)  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗體
肯塔基沙門氏菌PCR檢測試劑盒說明書小鼠Ⅳ型膠原(ColⅣ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

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