?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
2,6-Dimethyl-3,7-octadiene-2,6-diol3-戊酮 for HPLC,≥98% (GC)3,4-二羥基苯甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%

2,6-Dimethyl-7-octene-2,3,6-triol3-戊酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，用于環(huán)境分析，≥99.5% (GC)丹皮酚 99%

2-Caren-10-ol3-戊 99%丹皮酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品

2-Hydroxy-1,8-cineole2,2,4-*基-1,3-戊二單異丁酸酯 97%大麥芽堿  分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%

4-Hydroxy-2,6,6-trimethyl-1-cyclohexenecarboxylic acid甲基壬酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品苯酞 99%

5-Isopropyl-2-methylphel甲基壬酮 99%鹽酸蘇堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品

6-Hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadieic acid甲基壬酮 GCS,≥99.5% (GC)鹽酸蘇堿 98%

6’-O-Galloyl paeoniflorin甲基壬酮 ≥98%, FCC, Kosher, FG噻吩-2，5-二羧酸 98%

10-Hydroxy-2-deceic acid茜素黃R AR苯甲 AR,>98.5%(GC)

Albiflorin堿藍(lán)6B IND2-叔丁基苯酚 99%

Anemonine天青Ⅱ AR2,4-二叔丁基酚 97%

Benzoyloxypeoniflorin4-氨基-3-肼基-5-巰基-1,2,4-三唑(用于的測定) AR,95%2,6-二叔丁基酚 98%

Benzoylpaeoniflorin4-氨基-3-肼基-5-巰基-1,2,5-三唑(用于的測定) 99%2,4,6-三叔丁基酚 99%

Betulalbuside A氧化鋁G TLC溴化銨 AR,99.0%

Biondinin C鋁試劑 AR溴化銨 ACS

Borneol鋁試劑 ACS溴化銨 99.99% metals basis

十七碳酸（98%）DDX3 AntibodyPHAPI2/APRIL  酸性核磷蛋白32家族B抗體

隱色孔雀石綠（標(biāo)準(zhǔn)品）Radixin (C4G7) Rabbit mAbPHAP1  蛋白磷酸酶2A抑制劑1抗體

二十酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Contactin-2 (D4M7G) Rabbit mAbPH-4/P4H-TM  脯氨酸解酶4抗體

蓖麻油酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）BTAF1 AntibodyPGT/Slco2a1  溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體

甲酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）VEGF Receptor 3 (C28G5) Rabbit mAbPGRPS  肽聚糖識(shí)別蛋白1抗體

亞硫酸氫鈉甲萘醌（標(biāo)準(zhǔn)品）Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAbPGRN/Granulin  顆粒蛋白前體抗體

山崳酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Fibrillarin (C13C3) Rabbit mAbPGRMC  孕激素受體膜相關(guān)元件抗體

己酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-PRAS40 (Thr246) AntibodyPGLS  磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶抗體

二十四烷酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-EGF Receptor (Tyr998) (C24A5) Rabbit mAbPGK1  磷酸激酶1抗體

芥酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）α-Synuclein AntibodyPGGT1β  香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1β抗體
帶絳蟲通用PCR檢測試劑盒價(jià)格3,4-Difluorophel,99%通用試劑　5G

2-Bromo-5-fluorophel,97%通用試劑　5G

2,4-Difluorophel,99%通用試劑　5G

4-Bromo-2,6-difluorophel,97%通用試劑　1G

4-Fluoro-3-(trifluoromethyl)phel,98%通用試劑　1G

2-Chloro-5-(trifluoromethyl)phel,96%通用試劑　1G

3-Bromo-5-fluorophel,97%通用試劑　1G

2-Ami-4-bromophel,≥98.0%通用試劑　1G

4-Bromo-3,5-dimethylphel,99%通用試劑　5G

6-Bromo-2-naphthol,97%通用試劑　5G

2-Isopropoxyphel,97%通用試劑　1G

4-Phexyphel,99%通用試劑　5G

2,6-Difluorophel,98%通用試劑　5G

3-Fluorophel,98%通用試劑　5G

4-Ethylphel,≥98%通用試劑　25G