組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
Sudan I4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-氨基)甲基]苯氧乙酸 98% 10μg/ml,u=6～5%，酮

Sudan black BN-芴甲氧羰基-L-2,3-氨基酸  97%敵稗 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

Sudan red 7BN,N'-二叔丁氧羰基-L-組氨酸 BR敵稗標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

BBIHL-2,4-二氨基丁酸酸鹽 98%敵稗標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

Hoechst 33342D-2,4-二氨基丁酸 99%伏殺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=7～3%，酮

Fluorescein3,5-二-L-酪氨酸 BR伏殺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=7～3%，酮

Fluorescein disodium salt3,5-二硝基-L-酪氨酸 98%克螨特 分析標(biāo)準(zhǔn)品，91%

DAPI乙酰氨基二酸二乙酯  98%克螨特標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

Phelphthalein2-羥甲基-3,4-二氫吡喃 97%克螨特標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

Phelphthalein test paperD-精氨酰胺 98%磷胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%（）

PhelphthalexoneDHP HM Resin 0.5~1.1mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB磷胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%（）

Thymol內(nèi)皮素-1 ≥97.0% (HPLC)哌草磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，93%

Rhodamine 123Exendin Fragment 9-39 ≥95% (HPLC)三氯殺蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:異

Rhodamine BO-[(乙氧基羰基)胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟酸鹽  98%三氯殺蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:異

TMB艾塞那肽  97%異草胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品，94%

3,3,5,5-Tetramethyl benzidine solution liquid-1 componentN-(反式-環(huán)氧丁二?；?-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺  99%甲基嘧啶磷 100μg/ml,u=2%

二氯(光譜級(jí),≥99.9%,含50-150ppm戊烯穩(wěn)定劑)SEK1 (5C10) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgG

1,4-二氧六環(huán)(光譜純,≥99.5%)Nestin (10C2) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG

1,2-二氯乙烷(for spectroscopy,≥99.8%（GC))Synaptotagmin-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG

N,N-二甲基乙酰胺(光譜級(jí),≥99.8%(GC))BOB-1/OBF-1 AntibodyMouse Anti-human IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgG

鄰二氯苯(光譜純,99%)Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgG

二甲基亞砜(ACS,光譜級(jí))SGTA AntibodyMouse Anti-human IgG/Bio  生物素標(biāo)記的小鼠抗人IgG

乙(光譜純,≥99.8%)ApoA1 (5F4) Mouse mAbMouse Anti-human IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗人IgG

乙酸乙酯(ACS 光譜級(jí),≥99.5%)UTX (D3Q1I) Rabbit mAbMouse Anti-human IgG/AP  堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgG

異辛烷(光譜純)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgG

乙二(光譜純 ,≥99%)CD79A AntibodyMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgG
擬態(tài)弧菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家CD73抗體2',5'-Dihydroxyacetophene中文名：2,5-二羥基苯乙酮?jiǎng)e名：2,5-Dihydroxyacetophene; Quinacetophene分子式：C8H8O3

神經(jīng)細(xì)胞粘附分子CALL抗體8-Glucosyl-5,7-dihydroxy-2-(1-methylpropyl)chromone中文名：別名：分子式：C19H24O9

6型膠原蛋白α5抗體Dehydroperilloxin中文名：別名：分子式：C16H16O4

接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體4-O-Methylgrifolic acid中文名：別名：分子式：C24H34O4

CD24抗體3,4,5-Trimethoxyphenyl-(6'-O-galloyl)-O-β-D-glucopyraside中文名：別名：分子式：C22H26O13