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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
1-甲基咪唑(>98%,BR)LIMD1 Antibody(R)-2-氧代四-基氨酸芐酯

1-基咪唑(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-甲氧基-N-

1-萘(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-溴吡啶-酸

酸-1-萘酯(>98%,BR)Phospho-CDC37 (Ser13) (D8P8F) Rabbit mAb2,3,5-三-吡啶甲

二十八烷(>98%,BR)GPNMB (E1Y7J) Rabbit mAb3,二氟酸

1-基-5-巰基四氮唑(>98.5%,BR)SignalSilence® MUC1 siRNA I2--5-吡啶

新戊二(>98%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb阿德福韋

2,2-二甲基琥珀酸(>99%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb2--氟

2,4,5-*氧基甲(>99%,BR)CtBP2 Antibody2--三氟甲酸

三溴酚(>98%,BR)Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb芐基縮水甘油

2,4,6-三(二甲氨基)酚(>95%,BC)SignalSilence® GRB2 siRNA IO-(2,4,6-三磺酰基)酰羥肟酸酯

2,二甲基(>98%,BR)PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)-1,3,4,5-四氫-2H-1-并氮雜卓-2-酮

2,二甲(BR)PSMB6 (E1K9O) Rabbit mAb-甲基吡啶

2,7-二羥基萘(>98%,BR)ATPIF1 (D6P1Q) XP® Rabbit mAb氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶

2, 6-二醌-亞(>98%,BR)BAP1 (D7W7O) Rabbit mAb辛硫

2-金剛烷(>99%,BR)Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb2-氟-6-氨基嘌呤

2-金剛烷酮(>99%,BR)PathScan® Total Ezh2 Sandwich ELISA Kit3,5-二肼鹽酸鹽

2-氨基-甲酸(>98%,BR)Phospho-Merlin (Ser518) (D5A4I) Rabbit mAb2,二-6,7-二氫噻吩[3,2-D]嘧啶

漢坦病毒(HV)(IgM)ELISA試劑盒CXCR3/CD183  細(xì)胞表面趨化因子受體3400 ul

含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒CXCR3/CD183  細(xì)胞表面趨化因子受體3100 ul

含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒CXCR5/CD185  細(xì)胞表面趨化因子受體5300 ul

含SET域4(setd4)ELISA試劑盒Gastrin  胃泌素10 mg

含patatin樣脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒Gastrin  胃泌素/蛙皮素100 ul

過氧化脂質(zhì)(LPO)ELISA試劑盒Gastrin receptor  促胃泌素受體20 ul

過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒GATA-3  GATA結(jié)合蛋白3100 ul

過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒GATA-4  GATA結(jié)合蛋白4400 ul

過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒GATA-5  GATA結(jié)合蛋白5100 ul
牛特定基因序列PCR檢測試劑盒規(guī)格髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體Ditryptophenaline中文名：別名：分子式：C42H40N6O4

腺瘤樣息肉抗體Tyramine中文名：酪胺別名：分子式：C8H11

腺苷酸環(huán)化酶1抗體Lucidioline中文名：別名：分子式：C16H252

雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體Coulteropine中文名：別名：分子式：C21H216

淀粉樣肽前體蛋白抗體（C端）Victoxinine中文名：別名：分子式：C17H29