組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
六標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.100mg/ml,基體：異辛烷）LSR (D3E3N) XP® Rabbit mAb1-十二烷基-甲基咪唑四氟酸鹽

β-六六六（標(biāo)準(zhǔn)品）LSR (D3E3N) XP® Rabbit mAb1,3,5-三(溴甲基)

七標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/ml,溶劑：甲）CIP2A (D1M3H) Rabbit mAb2,5-二氟-羥基甲

外環(huán)氧七標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/ml,基體：石油）APC10 Antibody二茂鐵甲

外環(huán)氧七標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/ml,基體：石油）PTMScan®Pan-Methyl Lysine Kit異丁酸甲酯

氟吡禾靈（標(biāo)準(zhǔn)品）NUB1 Antibody溴-3,5-二

 N-異基（標(biāo)準(zhǔn)品）VAMP7 (D4D5J) Rabbit mAb2--5-(三氟甲基)溴芐

吡蟲啉（標(biāo)準(zhǔn)品）PLK2 (D5R2B) Rabbit mAb鎳鋁

稻瘟靈（標(biāo)準(zhǔn)品）RSK1/RSK2/RSK3 (D7A2H) Rabbit mAb9,9-二己基-2,7-二溴代芴

咪唑煙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）B-Raf (D9T6S) Rabbit mAb2--6-

異?。?biāo)準(zhǔn)品）OTUD7B/Cezanne-1 Antibody B

甲咪唑煙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-三氟甲氧基基異酸酯

水硫（標(biāo)準(zhǔn)品）ATRX (D1N2E) Rabbit mAb5-氟吡啶-甲

亞硫（標(biāo)準(zhǔn)品）BRCA1 (A8X9F) Rabbit mAb甲氧基-甲酸

異標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/ml,u=6%）TRF2 (P449) Antibody戊二酸甲酯

抑霉唑（標(biāo)準(zhǔn)品）Rhodopsin (D1N7X) Rabbit mAb甲基-戊

春雷霉素鹽酸鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）Ikaros (D6N9Y) Rabbit mAb五氟酸酯

標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/ml,u=4%）Phospho-Skp2 (Ser64) Antibody2-羥基-5-氨基吡啶鹽酸鹽

次氧化酶ELISA試劑盒IKK beta  KB抑制蛋白激酶β125 ml

雌酮(estrone,E1)ELISA試劑盒IKK gamma   KB抑制蛋白激酶γ100 ul

雌三(E3)ELISA試劑盒IKB beta  核因子κB抑制蛋白β100 ul

雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 ELISA試劑盒phospho-IkB beta (Ser23)  酸化KB抑制蛋白β100 ul

雌激素受體β(ESR2)ELISA試劑盒IKB alpha   核因子κB抑制蛋白α100 ul

雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)ELISA試劑盒phospho-IKK alpha (Thr23)  酸化KB抑制蛋白激酶α100 ul

雌激素(E)ELISA試劑盒phospho-IKK alpha (Tyr463)  酸化KB抑制蛋白激酶α100 ul

雌二受體(ER)ELISA試劑盒phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180)  酸化KB抑制蛋白激酶α100 ul

雌二(E2)ELISA試劑盒Phospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181)  酸化KB抑制蛋白激酶α/β100 ul
人肥胖易感基因TPCR測(cè)定試劑盒說明書補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體Dammaradienyl acetate中文名：別名：Dammaradiel acetate分子式：C32H52O2

補(bǔ)體C4d-A蛋白抗體Glochidone中文名：算盤子酮?jiǎng)e名：1,20(29)-Lupadien-3-one分子式：C30H46O

補(bǔ)體C4b-A蛋白抗體6-Deoxy-9α-hydroxycedrodorin中文名：別名：分子式：C27H34O9

陽離子通道相關(guān)蛋白2抗體Epifriedelal中文名：表木栓醇別名：分子式：C30H52O

陽離子通道相關(guān)蛋白3抗體24,25-Epoxytirucall-7-en-3,23-dione中文名：別名：分子式：C30H46O3