注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
京尼平苷酸Cre Recombinase (D7L7L) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)2-羥基-5-甲基吡啶

京尼平苷酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Jak3 (Tyr980/981) (D44E3) Rabbit mAb2-溴-5-氟

原兒茶酸,3,二羥基甲酸Phospho-Jak3 (Tyr980/981) (D44E3) Rabbit mAb硝酸鍶

原兒茶酸(標(biāo)準(zhǔn)品)DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb無(wú)水化鈣

原兒茶,3,二羥基甲DNMT1 (D63A6) XP® Rabbit mAb1,4,7,10-四氮環(huán)十二烷四鹽酸鹽

原兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)ERp72 (D70D12) XP® Rabbit mAb硫酸亞鐵銨

甲砜霉素甘氨酸酯鹽酸鹽ERp72 (D70D12) XP® Rabbit mAb2,6-二甲基大茴香

2.二羥基-6-甲基-煙酸酯La Antigen (D19B3) Rabbit mAb過(guò)氧化單硫酸鹽

恩拉霉素,持久殺菌素HSP27 (E1J4D) Rabbit mAb (IHC Preferred)溴化基鎂

(+)-兒茶素水合物SimpleChIP® Human γ-Actin Promor Primers硝酸鑭

(+)-兒茶素水合物（標(biāo)準(zhǔn)品）SGLT1 Antibody基化鎂

(+)-兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）mTOR (7C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)9-蒽酸

維生素B6,鹽酸吡哆Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴-氟甲酸

維生素B6（標(biāo)準(zhǔn)品）α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)脫羧雷他定

非達(dá)霉素SimpleChIP® Human γ-Actin Intron 3 Primers嘧啶-5-甲

比枯枯靈,右旋荷包牡丹mTOR (7C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-基吡啶

比枯枯靈,右旋荷包牡丹（標(biāo)準(zhǔn)品）STING (D1V5L) Rabbit mAb (Rodent Preferred)溴-氟甲酸

石杉甲Sox2 (D6D9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)四氫吡喃-2-甲

細(xì)胞分裂周期蛋白5phospho-c-Abl(Tyr89) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、非受體酪氨酸激酶c-AblIgG100 ul

β淀粉樣肽/Aβ42Phospho-HDAC3 (Ser424)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、組蛋白去?；?IgG100 ul

ADCK4蛋白CAD/CPAN/FITC  熒光素標(biāo)記Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶IgG100 ul

抑癌蛋白AIMP3CA I/FITC  熒光素標(biāo)記碳酸酐酶1IgG100 ul

相關(guān)蛋白AKAPCA II /FITC  熒光素標(biāo)記碳酸酐酶2IgG100 ul

蛋白激酶A錨定蛋白6Calcineurin Alpha /PP-2B alpha 1 /FITC  熒光素標(biāo)記蛋白酸酯酶-2B催化亞單位IgG100 ul

肺α/β水解酶蛋白1caldesmon/smooth muscle /FITC  熒光素標(biāo)記鈣調(diào)結(jié)合蛋白/鈣調(diào)素結(jié)合蛋白IgG100 ul

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白13p-Caldesmon/FITC  熒光素標(biāo)記酸化鈣介質(zhì)素IgG100 ul

水解酶結(jié)構(gòu)域蛋白14BSmoothened/SMOH /FITC  熒光素標(biāo)記跨膜蛋白SmoothenedIgG100 ul
草魚(yú)出血熱病毒(GCHV)核酸試劑盒價(jià)格δ氨基乙酰丙酸脫酶抗體Dihydrooxoepistephamiersine中文名：別名：分子式：C21H277

肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體Mangochinine中文名：別名：(1R,2S)-(-)-Mangochinine分子式：C19H224

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體Acetylcephalotaxine中文名：別名：分子式：C20H235

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體2,7-Dihydrohomoerysotrine中文名：別名：分子式：C20H273

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體Cephalocyclidin A中文名：別名：分子式：C17H195
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。